Во время пункции врач получает фолликулярную жидкость и передаёт её в эмбриологическую лабораторию. Эмбриолог исследует материал под микроскопом и ищет комплексы, содержащие яйцеклетки.

Количество полученных яйцеклеток может отличаться от количества фолликулов, которые врач видел на УЗИ. Это связано с тем, что:

• не каждый фолликул содержит яйцеклетку;
• некоторые яйцеклетки могут быть незрелыми;
• получить содержимое отдельного фолликула технически удаётся не всегда;
• часть фолликулов может отличаться по размеру и степени зрелости.

После обнаружения яйцеклетки помещают в специальную питательную среду и переносят в инкубатор, где поддерживаются необходимые температура, влажность и состав газовой среды.

Для успешного оплодотворения яйцеклетка должна достичь определённой стадии зрелости. При использовании метода ИКСИ окружающие её клетки удаляют, после чего эмбриолог оценивает степень зрелости под микроскопом.

Зрелые яйцеклетки находятся на стадии, подходящей для оплодотворения. Незрелые клетки могут не оплодотвориться или не дать нормально развивающийся эмбрион.

Поэтому количество зрелых яйцеклеток обычно меньше общего количества клеток, полученных во время пункции.

При классическом ЭКО яйцеклетки некоторое время сохраняются вместе с окружающими клетками, поэтому их зрелость не всегда оценивается таким же способом непосредственно перед оплодотворением.

Оплодотворение может проводиться двумя основными способами: классическим ЭКО или методом ИКСИ.

Классическое ЭКО

При классическом ЭКО подготовленные сперматозоиды добавляют в питательную среду к яйцеклеткам. Далее сперматозоид должен самостоятельно проникнуть внутрь яйцеклетки.

Метод может применяться при удовлетворительных показателях спермы и отсутствии других оснований для использования ИКСИ.

ИКСИ

ИКСИ — это введение одного предварительно отобранного сперматозоида непосредственно в цитоплазму зрелой яйцеклетки с помощью микроинструментов.

Метод может применяться:

• при выраженных изменениях спермограммы;
• при небольшом количестве полученных яйцеклеток;
• после отсутствия или низкой частоты оплодотворения в предыдущих программах;
• при использовании размороженных яйцеклеток;
• при проведении некоторых видов генетического исследования эмбрионов;
• в других клинических ситуациях.

ИКСИ помогает преодолеть отдельные препятствия на этапе проникновения сперматозоида в яйцеклетку, но не гарантирует оплодотворение и дальнейшее развитие эмбриона.

Выбор способа оплодотворения врач и эмбриолог определяют индивидуально.

Примерно через 16–18 часов после соединения яйцеклеток со сперматозоидами эмбриолог оценивает результат.

Одним из признаков нормального оплодотворения считается наличие двух пронуклеусов — структур, содержащих генетический материал яйцеклетки и сперматозоида.

Если оплодотворение прошло нормально, клетка называется зиготой. В дальнейшем она начинает делиться и становится эмбрионом.

На этом этапе возможны разные варианты:

• яйцеклетка оплодотворилась нормально;
• признаков оплодотворения нет;
• наблюдаются признаки аномального оплодотворения;
• оценить результат однозначно не удаётся.

Для дальнейшего культивирования отбираются зиготы с нормальными признаками оплодотворения.

После оплодотворения эмбрион начинает делиться. Одна клетка превращается в две, затем в четыре, шесть, восемь и больше клеток. Эти клетки называются бластомерами.

На второй и третий дни эмбриолог оценивает:

• количество клеток;
• скорость деления;
• равномерность бластомеров;
• наличие и степень фрагментации;
• другие морфологические особенности.

Развитие не всегда происходит строго по одинаковому расписанию. Один эмбрион может делиться немного быстрее, другой — медленнее. Эмбриолог оценивает не отдельное число клеток, а общую динамику развития.

На этом этапе некоторые эмбрионы могут остановиться в развитии. Это может быть связано с особенностями яйцеклетки, сперматозоида, генетическими нарушениями и другими биологическими факторами.

Примерно на четвертый день клетки эмбриона начинают тесно соединяться друг с другом. Отдельные границы между ними становятся менее заметными. Этот процесс называется компактизацией, а сам эмбрион на данной стадии — морулой.

Морула состоит из множества клеток и внешне напоминает плотное скопление. Переход к этой стадии показывает, что эмбрион продолжает последовательно развиваться.

Внутри морулы начинается подготовка к формированию бластоцисты.

Следующий важный этап — образование бластоцисты. Обычно он происходит на пятый или шестой день, но отдельным эмбрионам для этого требуется больше времени.

В бластоцисте уже можно различить:

• внутреннюю клеточную массу — из неё в дальнейшем развивается плод;
• трофэктодерму — её клетки участвуют в формировании плаценты;
• полость бластоцисты, заполненную жидкостью.

По мере развития полость увеличивается, а бластоциста расширяется. Затем она должна выйти из окружающей её оболочки, чтобы получить возможность прикрепиться к эндометрию.

Эмбрионы, достигшие подходящей стадии развития и отвечающие лабораторным критериям, могут быть перенесены, заморожены или подвергнуты биопсии при проведении генетического тестирования.

Продлённое культивирование позволяет наблюдать развитие эмбрионов в течение нескольких дней и получить больше информации об их потенциале.

Преимущества культивирования до стадии бластоцисты могут включать:

• возможность оценить динамику развития;
• более обоснованный выбор эмбриона для переноса;
• уменьшение необходимости переноса нескольких эмбрионов;
• более физиологичное соответствие стадии развития эмбриона состоянию эндометрия.

Однако не все эмбрионы достигают стадии бластоцисты. При небольшом количестве эмбрионов врач и эмбриолог могут рассмотреть перенос на более раннем этапе. Решение принимается индивидуально с учётом возраста женщины, числа и качества эмбрионов, истории предыдущих программ и возможностей лаборатории.

Эмбрионы культивируются в специальных инкубаторах. В них поддерживаются стабильные условия, приближенные к среде женского организма:

• определённая температура;
• необходимый уровень углекислого газа и кислорода;
• подходящая влажность;
• стабильная кислотность питательной среды.

Эмбриологи стараются минимизировать воздействие внешней среды. Все процедуры проводятся по установленным лабораторным протоколам.

В некоторых лабораториях используются инкубаторы с системой непрерывной съёмки — time-lapse. Такая система позволяет получать изображения эмбриона через заданные промежутки времени и оценивать динамику развития без частого извлечения из инкубатора.

Однако сама по себе видеосъёмка не гарантирует наступление беременности и не заменяет профессиональную оценку эмбриолога.

Эмбриологическая оценка основана на внешних признаках и темпе развития эмбриона.

На стадии деления учитываются:

• количество клеток;
• их форма и равномерность;
• степень фрагментации;
• соответствие развития ожидаемому сроку.

При оценке бластоцисты учитываются:

• степень её расширения;
• внешний вид внутренней клеточной массы;
• состояние клеток трофэктодермы.

Для описания могут использоваться цифры и буквы. Система оценки помогает эмбриологу выбрать эмбрионы с более благоприятными морфологическими характеристиками.

При этом высокая морфологическая оценка не гарантирует нормальный хромосомный набор и наступление беременности. И наоборот, эмбрион не с самой высокой оценкой в ряде случаев может привести к рождению здорового ребёнка.

Класс эмбриона — это инструмент прогнозирования, а не окончательный диагноз.

Во время лабораторного этапа происходит естественное уменьшение количества потенциального материала:

• Не во всех фолликулах находятся яйцеклетки.
• Не все полученные яйцеклетки оказываются зрелыми.
• Не каждая зрелая яйцеклетка оплодотворяется.
• Не все зиготы начинают правильно делиться.
• Часть эмбрионов останавливается в развитии до стадии бластоцисты.
• Не каждая бластоциста подходит для переноса или криоконсервации.

На результат влияют возраст женщины, качество яйцеклеток и сперматозоидов, особенности конкретного цикла, причины бесплодия и биологические процессы раннего развития.

Сам факт остановки отдельных эмбрионов не означает, что во время стимуляции, пункции или культивирования была допущена ошибка.

В отдельных случаях врач может предложить преимплантационное генетическое тестирование — ПГТ.

Для исследования у бластоцисты берут несколько клеток трофэктодермы. Эта процедура называется биопсией. После неё эмбрион обычно замораживают, а полученный материал направляют в генетическую лабораторию.

Существуют разные виды ПГТ, предназначенные для решения различных задач: выявления изменений числа хромосом, поиска конкретного наследственного заболевания или структурных хромосомных перестроек.

Генетическое тестирование не назначается автоматически всем пациентам. Решение принимается после консультации репродуктолога и, при необходимости, врача-генетика. Важно заранее обсудить возможности, ограничения и точность выбранного метода.

После завершения культивирования возможны несколько вариантов.

Свежий перенос

Один из эмбрионов переносится в полость матки в том же цикле, в котором проводилась пункция.

Свежий перенос проводится не всегда. Врач учитывает состояние женщины, уровень гормонов, эндометрий, риск синдрома гиперстимуляции яичников и другие факторы.

Криоконсервация

Эмбрионы подходящего качества замораживают методом витрификации и помещают на хранение. В дальнейшем их можно использовать в криопротоколе.

Витрификация представляет собой быстрое замораживание, при котором минимизируется образование кристаллов льда, способных повредить клетки.

Криоконсервация может применяться:

• для переноса в следующем цикле;
• при необходимости отложить перенос;
• после биопсии для ПГТ;
• при наличии нескольких эмбрионов;
• при повышенном риске осложнений после стимуляции;
• в других медицинских ситуациях.

Наблюдение за развитием

Если на пятый день эмбрион ещё не достиг стадии, подходящей для переноса или замораживания, культивирование может быть продолжено. Часть эмбрионов формирует бластоцисту на шестой или седьмой день.

Решение о дальнейшей работе с каждым эмбрионом принимает эмбриолог по действующим лабораторным критериям.

При соблюдении условий криохранения эмбрионы могут храниться длительное время. Конкретные сроки, порядок продления хранения и оформления согласий определяются договором с клиникой и действующими требованиями.

Продолжительность хранения сама по себе не считается главным фактором, определяющим репродуктивный потенциал эмбриона. Большое значение имеют возраст женщины на момент получения яйцеклеток и характеристики эмбриона до замораживания.

В Международной Био Клинике после пункции яйцеклетки поступают в эмбриологическую лабораторию, где специалисты проводят их оценку, оплодотворение и культивирование эмбрионов.

Тактика определяется индивидуально: учитываются качество половых клеток, особенности программы, количество развивающихся эмбрионов и медицинские показания.

Репродуктолог и эмбриолог сообщают пациентам основные результаты лабораторного этапа и объясняют возможные дальнейшие действия: перенос, криоконсервацию или проведение дополнительного исследования.

Записаться на консультацию репродуктолога можно по телефону Международной Био Клиники или через форму записи на сайте.